Иммунофенотипирование клеток костного мозга как делается

Что такое

Иммунофенотипирование клеток — это определение поверхностных маркёров и, соответственно, принадлежности клеток к той или иной субпопуляции. Иммунофенотипирование — метод, основанный на реакции антител с антигенами и используемый для определения специфических типов клеток в образцах крови, костного мозга, лимфатических узлов или других тканей. К антителам, которые реагируют со специфическими антигенами клеток, присоединена особая флюоресцентная метка. Эту метку можно обнаружить с помощью специальных приборов – проточных цитометров или люминесцентных микроскопов. Иммунофенотипирование с использованием метода проточной цитометрии имеет преимущества перед использованием других методов за счет большей точности, скорости, возможности одновременной регистрации нескольких антигенов на одной клетке.

В настоящее время иммунофенотипирование клеток крови и костного мозга является «золотым стандартом» в диагностике иммунодефицитов, лимфопролиферативных, аутоиммунных и инфекционных заболеваний.

Как известно, лейкоциты экспрессируют особые у каждой субпопуляции поверхностные молекулы, которые могут служить маркерами (метками).

Разработана систематизированная номенклатура маркерных молекул; в ней группы моноклональных антител, каждая их которых специфически связывается с определенной маркерной молекулой, обозначены символом CD (Claster Designation). Поскольку набор антигенов клеточной поверхности лимфоцитов зависит не только от типа и стадии дифференцировки, но и от их функционального состояния, с помощью моноклональных антител можно не только различать разные субпопуляции клеток, но и отличать покоящиеся клетки от активированных.

При каких симптомах делается

При каких заболеваниях делается

  • аллергические (крапивница, аллергический ринит, поллиноз, отек Квинке, атопический дерматит, атопический дерматит у детей, бронхиальная астма, экземы);
  • инфекционные заболевания (вирусные гепатиты, герпетическая инфекция, рожа рецидивирующая);
  • заболеваний мочеполовой сферы (простатит, пиелонефрит, цистит, эндометриоз);
  • вторичные иммунодефицитные состояния (герпес, фурункулез, и др.);
  • заболевания ЛОР-органов (хронические тонзиллит, фарингит, гайморит, отит);
  • аутоиммунные (артрит, системная склеродермия, красная волчанка, рассеянный склероз, хронический аутоиммунный тиреоидит);
  • сердечно-сосудистые (состояния после перенесенного инфаркта миокарда и инсульта, артериальная гипертония, варикозная болезнь);
  • опорно-двигательного аппарата (ревматоидный артрит, посттравматические состояния, остеохондроз и другие болезни позвоночника, заболевания суставов);
  • желудочно-кишечного тракта (гастродоуденит, холецистит, хронический и неспецифический язвенный колит, болезнь Крона) и др.

Для проверки/улучшения работоспособности каких органов нужно делать

Желудок, кишечник, мочевик, сердце.

Материал для сдачи

Пунтат костного мозга с антикоагулянтом (гепарин, ЭДТА).

Лаборатория иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга


Заведующий лабораторией — Гальцева Ирина Владимировна (на фото справа).

Лаборатория была организована 1 марта 2013 г.

Иммунофенотипирование клеток, осуществляемое с помощью проточной цитофлуориметрии, широко применяется в клинико-диагностических и научных исследованиях. Отличительной чертой данного анализа является возможность определения фенотипа единичных клеток. Метод основан на применении моноклональных антител к антигенам дифференцировки, сочетание которых позволяет выявлять разнообразные клеточные популяции. Совокупность антигенов на поверхности клетки называется иммунофенотипом. Проточная цитофлуориметрия за последние 20 лет стала неотъемлемым исследованием в диагностике различных гематологических заболеваний, в частности лимфом, лейкозов, плазмоклеточных неопластических заболеваний, пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) и др. На основании данных об иммунофенотипе и анализе большого количества клеток проточная цитофлуориметрия позволяет находить крайне редко встречающиеся клеточные субпопуляции.

Читайте также:  В спинном мозге сколько сегментов

Коллектив лаборатории. Гальцева Ирина Владимировна (сидит) — заведующий лабораторией. Стоят: Капранов Н. М., Давыдова Ю. О.

Сотрудники лаборатории являются высококвалифицированными специалистами в области проточной цитофлуориметрии, прошли обучение не только в клинических центрах России, но и в зарубежных университетах и имеют сертификаты по основам проточной цитометрии. Прошли обучение в международной школе цитометрии в г. Женева (Швейцария) и получили сертификат, подтверждающий адекватность анализа и разрешающий проводить исследование ПНГ-клона (Россия, Америка). Также получили практический опыт работы по диагностике и анализу острых лейкозов и лимфом в Гентском университете в Бельгии. Сотрудники лаборатории регулярно посещают международные конференции и обмениваются знаниями с зарубежными и российскими коллегами.

Лаборатория тесно сотрудничает с научно-клиническими подразделениями НМИЦ гематологии. Основным направлением работы лаборатории является стандартизация и применение метода проточной цитофлуориметрии для диагностики минимальной остаточной болезни (МОБ) при таких заболеваниях, как множественная миелома, острые лимфобластные и миелобластные лейкозы.

В лаборатории осуществляют подсчёт гемопоэтических CD34-позитивных стволовых клеток на рутинной основе в образцах периферической крови, костного мозга и продуктах лейкоцитафереза согласно международному протоколу ISHAGE (International Society of Hematotherapy and Graft Engineering).

Врач КЛД Давыдова Юлия Олеговна.

Диагностика плазмоклеточных неоплазий и поиск МОБ при множественной миеломе проводится согласно последним мировым рекомендациям по стандартизации исследований, опубликованным в 2016 году (Stetler—Stevenson, Paiva, Rawstron). Мониторинг МОБ при острых В- и Т-линейных лимфобластных лейкозах проводится в рамках протоколов ОЛЛ-2009 и ОЛЛ-2016. Проводится оптимизация и отработка методики поиска МОБ при острых миелобластных лейкозах. Впервые в России в лаборатории начато применение и интеграция иммунофенотипического исследования в схему диагностики миелодиспластических синдромов. Данный анализ проводится в соответствии с европейскими рекомендациями сообщества LeukemiaNet.

Медицинский физик Капранов Николай Михайлович.

В лаборатории проводятся многочисленные исследования, которые ложатся в основу диссертационных работ врачей-гематологов и трансфузиологов. С участием сотрудников лаборатории опубликовано большое количество печатных работ и стендовые доклады на международных симпозиумах. В сферу научных интересов входят исследования субпопуляционого состава крови и костного мозга у больных после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, в частности Т-регуляторных клеток; изучение циркулирующих эндотелиальных клеток у больных после трансплантации; исследование экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на мобилизованных стволовых клетках крови; изучение динамики ПНГ-клона у больных апластической анемией; проводится изучение элементов иммунологического синапса при лимфомах; фиксированных антитромбоцитарных антител у больных с множественными трансфузиями. На базе лаборатории проведено исследование активационных маркеров тромбоцитов в заготовленных при различных условиях тромбоконцентратах доноров, оценивается динамика изменения количества циркулирующих CD34+ клеток в периферической крови у пациентов после проведения спленэктомии, оцениваются различные свойства мультипотентных мезенхимных стромальных клеток, использующихся для профилактики реакции трансплантат против хозяина после трансплантации аллогенных стволовых клеток, оценивается динамика изменения субпопуляционного состава лимфоцитов крови у больных острыми В-лимфобластными лейкозами, получающих таргетную терапию и пациентов после выполнения трансплантации аллогенной почки.

Давыдова Юлия Олеговна — врач клинической лабораторной диагностики.

Капранов Николай Михайлович — медицинский физик.

Читайте также:  Рэг головного мозга что это такое расшифровка

Прогресс в развитии современной гематологии в определенной степени связаны с увеличением аналитических возможностей лабораторной диагностики. Метод иммунофенотипирования (ИФТ) широко применяется для диагностики заболеваний, оценки эффективности терапии и выявления минимальной остаточной болезни, количественного определения гемопоэтических стволовых клеток периферической и пуповинной крови, костного мозга, при мониторировании реакции трансплантата против хозяина. В связи с накоплением значительного объема информации по строению и функции маркерных молекул лейкоцитов разработана и постоянно пополняется специализированная номенклатура CD, включающая 350 маркеров CD [3].

Лимфопролиферативные заболевания (ЛПЗ) являются одними из часто встречающихся опухолевых заболеваний кроветворной ткани у взрослых. К ним относят группу заболеваний лимфоидной ткани, при которых в результате опухолевой трансформации возникает блок на определенной стадии развития лимфоцитов. Способность лимфоидных клеток к опухолевой трансформации практически на всем пути клеточной дифференцировки определяет многообразие ЛПЗ. В настоящее время насчитывается более 30 различных нозологических форм ЛПЗ [4]. Плазмоклеточная лейкоз (ПКЛ) представляет собой редкий и агрессивный вариант множественной миеломы (ММ), который не включен ни в FAB-, ни в ВОЗ-классификацию острых лейкозов. Согласно клинической классификации лимфоидных опухолей, плазмоклеточный лейкоз рассматривается в качестве одного из вариантов очень агрессивных В-клеточных лимфом [3]. ПКЛ, по данным литературы, редкий вариант лейкозов. Его частота колеблется от 2 до 4,4% [2]. Прогноз ПКЛ неблагоприятный, а медиана выживаемости исчисляется месяцами. Диагноз ПКЛ не вызывает сомнений в том случае, если содержание циркулирующих плазматических клеток в крови более 20%. Различают 2 формы ПКЛ. Первичный — впервые во время диагностики выявляется высокий процент плазматических клеток в периферической крови, данный вариант встречается в более молодом возрасте, чаще у женщин (62%). Характеризуется оссалгиями, психическими нарушениями, кровотечениями, иногда органомегалией, почечной недостаточностью, гиперкальцийемией [2]. Вторичный ПКЛ возникает в продвинутой стадии ММ, при прогрессировании заболевания, не поддаётся лечению.

При дифференциальной диагностике парапротеинемий часто встречаются сходные клинико-лабораторные данные, наблюдающиеся при многих патологических процессах и зачастую бывает сложно своевременно поставить диагноз. В программу обследования необходимо включать довольно разнообразные тесты и изучать их в динамике течения опухолевого процесса.

При диагностике ММ морфологическое исследование костного мозга является стандартной процедурой и включает цитологическое и гистологическое исследования. По данным Байкова В.В. (2007 г.), более чем в половине наблюдений диагностика ММ затруднений не вызывала: в трепанобиоптатах обнаруживалось более 30% мономорфных или умеренно полиморфных клеток с очевидными чертами плазматической дифференцировки. В остальных наблюдениях при исследовании препаратов в обзорных окрасках было трудно определить истинное содержание плазматических (миеломных) клеток в костном мозге, а в части случаев — даже классифицировать клетки как миеломные. Кроме того, у трети больных миеломные клетки по результатам обзорных исследований составляли менее 30%, а у 7% — менее 10% всех миелокариоцитов [1].

Целесообразно поводить обследование больных с использованием всех доступных методов, включая иммунофенотипирование плазматических клеток костного мозга.

В противоположность нормальным плазмоцитам, миеломные клетки не экспрессируют пан-В-клеточный антиген CD19. Что касается других В-клеточных антигенов, то экспрессия CD79α довольно характерна, а CD20 — непостоянна [1]. В течение ряда лет стандартным подходом к избирательному выявлению миеломных клеток считалась реакция на CD38, эктоэнзимную молекулу, участвующую в кальциевом обмене. В дальнейшем было показано, что CD38 выявляется на довольно большом числе клеток костного мозга практически всех линий дифференцировки. В конце 1990-х гг. стали доступны моноклональные антитела к синдекану-1 (CD138) [5], одному из трансмембранных протеогликанов, широко экспрессированных на мембране плазматических и миеломных клеток. Эта молекула обеспечивает межструктурные взаимодействия, адгезию и миграцию. Имеются сведения, что кроме иммуноглобулинсекретирующих клеток CD138 выявляется на небольшой части преВ клеток. Другие клетки костного мозга, включая стромальные, CD138 не содержат. Экспрессия CD138 была продемонстрирована на 95% миеломных клеток у 97% больных [5]. Описан феномен потери синдекана-1 с поверхности миеломных клеток с накоплением его в строме, как правило, в участках фиброза. Типичный фенотип опухолевых клеток при ММ чаще всего описывается так: cIg+, CD19-, CD20-, CD38+, CD43+, CD45-, CD56+, CD138+, bcl-2+, однако постоянными (95% и более наблюдений) признаками являются только наличие cIg (и легких цепей), CD138 и CD38 и отсутствие CD19. CD10, CD27, CD28, CD29, СD33, CD45RO, CD106, CD117, CD126 и циклин D1 выявляются при иммуногистохимическом и проточном флюориметрическом исследовании в 5-50% случаев [7, 8, 9, 11]. Экспрессия некоторых маркеров может иметь прогностическое значение. Pei Lin и соавт. (2004) проанализировали иммунофенотип 306 пациентов с ММ. На плазматических клетках были идентифицированны CD138, CD38, CD45, CD56, CD117 в 71,7; 17,8; 9,3; 8,8 и 5,2% случаев соответственно. CD19 был отрицательный больше, чем в 99% случаев [10].

Читайте также:  Аминалон для детей с задержкой развития отзывы

По данным R-Garcia-Sanz (1999), проанализировавшим 26 больных с первичным ПКЛ, для больных (в отличие от ММ) были характерны III стадия заболевания, экстрамедуллярные очаги, высокий уровень ЛДГ. Обнаружена также высокая пролиферативная активность опухолевых клеток в периферической крови и костном мозге. При ИФТ опухолевые клетки больных как ММ, так и ПКЛ экспрессировали СD38+ СD 138+ СD 2+ СD 3+ СD16+ СD10+ СD13+ СD15+. Отличие ПКЛ от ММ было только в экспрессии антигенов СD 56+, СD9+, HLA-DR, СD117+ СD20+. Характерной особенностью лейкемических плазматических клеток периферической крови и костного мозга при ПКЛ является частая утрата маркера СD 56+ [6].

В Тюменском областном гематологическом центре с 2008 г. было выявлено 5 пациентов с ПКЛ. Все больные — женщины, средний возраст составил 52 года (от 38 до 62 лет). Из них у 1 из пациенток ПКЛ являлся вторичным, у остальных ‒ первичным. ИФТ костного мозга проведено большинству больных. Данные о пациентах представлены в таблице.

Клинико-лабораторные особенности пациентов с ПКЛ в Тюменском гематологическом центре с 2008 г.

Читайте также:
Adblock
detector