Для количественной оценки мегакариоцитов используют следующие методы:
- подсчет в камере;
- подсчет в мазках по полям зрения;
- подсчет в мазках по отношению к количеству всех ядерных клеток костного мозга.
Все эти методы не являются достаточно точными. Наиболее точное количественное представление дает подсчет их в срезах костного мозга, полученного при трепанобиопсии.
Подсчет мегакариоцитов в счетной камере.
Пунктат костного мозга разводят в 20 раз. Для этого в пробирку с 0,4 мл 3 — 5% уксусной кислоты вносят 0,02 мл пунктата, содержимое пробирки перемешивают и заполняют камеру Фукса — Розенталя. Подсчет производят по всей поверхности сетки. Мегакариоциты в камере видны в виде крупных клеток с полиморфным гиперсегментированным ядром и широкой зоной цитоплазмы.
Количество мегакариоцитов в 1 мкл определяют по формуле:
- где X — количество мегакариоцитов в 1 мкл;
- n — число сосчитанных по всей клетке мегакриоцитов;
- 20 — разведение костного мозга;
- 3,2 — объем камеры Фукса — Розенталя
Недостаточная точность метода зависит от того, что в камере не распознаются мелкие формы (мегакариобласты, голые ядра и др.), которые не попадают в счет. Преимущество метода — равномерное распределение клеток в счетной камере.
У взрослых (с учетом данных разных авторов) количество мегакариоцитов составляет 53 — 96,86 в 1 мкл, у детей в возрасте 5 мес. — 3,5 лет их количество равно 105,2 — 126,8 в 1 мкл.
Подсчет мегакариоцитов в мазках по полям зрения.
В этом случае считают количество мегакариоцитов по периметру мазка на малом увеличении микроскопа, что соответствует примерно 250 полям зрения. Мегакариоциты видны в мазках при малом увеличении в виде крупных клеток (в 5 — 20 раз больше лейкоцита). Подсчет проводят в нескольких мазках с выведением средних цифр.
Недостатки метода связаны: с техникой пунктирования — возможное разведение костного мозга периферической кровью; с техникой приготовления мазка (короткий тонкий и длинный густой мазок из материала одного и того же пациента дадут разное количество мегакариоцитов); с уровнем квалификации специалиста — иногда пропускаются молодые формы мегакариоцитов, которые не имеют таких больших размеров, как зрелые формы или за мегакариоцит неверно принимаются куски краски и остеокласты(в случае сомнения, следует перевести микроскоп на большое увеличение и удостоверится, действительно ли найденный на малом увеличении объект является мегакариоцитом).
В норме в мазках пунктата костного мозга в 250 полях зрения содержится 5 — 12 мегакариоцитов.
Подсчет мегакариоцитов в мазках по отношению к количеству всех ядерных клеток костного мозга.
При подсчете миелограммы (подсчет не менее 500 клеток) считаются и встречающиеся мегакариоциты, а затем выводится их количество в процентах. Недостаток метода в основном связан с тем, что в мазках мегакариоциты располагаются неравномерно, сосредотачиваясь больше по краям препарата и в конце мазка.
В среднем, по данным разных авторов, количество мегакариоцитов в пунктате костного мозга составляет от 0 до 1,2%.
Резкое увеличение количества мегакариоцитов в костном мозге наблюдается при хронических лейкозах миелопролиферативной природы, особенно при полицитемии, а также при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре (болезнь Верльгофа), при циррозе печени с явлениями гиперспленизма. Увеличение числа мегакариоцитов выявляется при злокачественных новообразованиях, при симптоме геморрагической тромбоцитемии, после острой кровопотери.
Уменьшение количества мегакариоцитов характерно для острых лейкозов, лимфопролиферативных заболеваний, а также для гипо- и апластических состояний.
Литература:
- Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва «Медицина» 1975 г.
- Справочник «Лабораторные методы исследования в клинике» под ред. проф. В. В. Меньшикова Москва «Медицина» 1987 г.
Похожие статьи
Для подсчета миелокариоцитов пунктат костного мозга разводят в 200 раз. Для этого к 4 мл 3 -5% раствора уксусной кислоты добавляют 0,02 мл пунктата. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. После оседания форменных элементов (через 1 — 2 мин) подсчитывают миелокариоциты в 100 больших квадратах (аналогично подсчету числа лейкоцитов в периферической крови).
Раздел: Гемоцитология
Подсчет абсолютного количества миелокариоцитов и мегакариоцитов с разведением костного мозга проводится не во всех лабораториях, поэтому часто исследование костного мозга ограничивается только исследованием мазков с подсчетом миелограммы. Миелограмма — процентное содержание различных миелокариоцитов.
Раздел: Гемоцитология
Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.
Раздел: Гемоцитология
Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту.
Раздел: Анализ мочи
Мегакариобласты — родоначальные клетки мегакариоцитарного ряда. Размер — около 20 мкм. Ядро круглое, с мелкосетчатой структурой хроматина, иногда сплетенного в виде клубка. Структура ядра грубее, чем у недифференцированного бласта, нередко видны ядрышки. Цитоплазма базофильная, беззернистая, имеет вид узкого ободка. Часто контуры клеток неровные, с отростками цитоплазмы и образованием «голубых» пластинок.
Раздел: Гемоцитология
Миелограмма — процентное соотношение клеточных элементов в мазках, приготовленных из пунктатов красного костного мозга. Костный мозг содержит две группы клеток: клетки ретикулярной стромы (фибробласты, остеобласты, жировые и эндотелиальные клетки), составляющие абсолютное меньшинство по численности, и клетки кроветворной ткани (паренхимы). Референтные показатели миелограммы приведены в табл..
В настоящее время биопсия красного костного мозга — обязательный метод диагностики в гематологии, так как позволяет оценивать тканевые взаимоотношения в костном мозге.
Исследование красного костного мозга проводят для подтверждения или установления диагноза различных форм гемобластозов и анемий. Миело-грамму необходимо оценивать, сопоставляя её с картиной периферической крови. Диагностическое значение имеет исследование костного мозга при поражении его лимфогранулематозом, туберкулёзом, болезнью Гоше, Нимана-Пика, метастазами опухолей, висцеральным лейшманиозом. Это исследование широко используется в динамике для оценки эффективности проводимой терапии.
Элементы красного костного мозга
Все нейтрофильные элементы
Индекс созревания нейтрофилов
Эозинофилы (всех генераций)
Все эритроидные элементы
Индекс созревания эритрокариоцитов
0,05-0,15х10 9 /л или 0,2-0,4%
Для исследования красного костного мозга производят пункцию грудины или подвздошной кости, из пунктата готовят мазки для цитологического анализа. При аспирации костного мозга всегда происходит попадание крови, тем больше, чем больше получено аспирата. Пунктат обычно оказывается разведённым периферической кровью не более чем в 2,5 раз. Признаки большей степени разведения костного мозга периферической кровью следующие.
■ Бедность пунктата клеточными элементами.
■ Резкое увеличение лейко-/эритробластического соотношения (при соотношении 20:1 и выше исследование пунктата не проводят).
■ Снижение индекса созревания нейтрофилов до 0,4-0,2.
■ Приближение относительного содержания сегментоядерных нейтро-филов и/или лимфоцитов к таковому в периферической крови.
При исследовании красного костного мозга подсчитывают процентное содержание костномозговых элементов, а также определяют абсолютное содержание миелокариоцитов и мегакариоцитов.
■ Миелокариоциты. Уменьшение содержания миелокариоцитов наблюдают при гипопластических процессах различной этиологии, воздействии на организм человека ионизирующего излучения, некоторых химических веществ и ЛС и др. Особенно резко количество ядерных элементов снижается при апластических процессах. При развитии миелофиброза, миелосклероза костномозговой пунктат скуден и количество ядерных элементов в нём также снижено. При наличии между костномозговыми элементами синцитиальной связи (в частности, при миеломной болезни) костномозговой пунктат получают с трудом, поэтому содержание ядерных элементов в пунктате может не соответствовать истинному количеству миелокариоцитов в костном мозге. Высокое содержание миелокариоцитов наблюдают при лейкозах, витамин В12-дефицитных анемиях, гемолитических и постгеморрагических анемиях, то есть при заболеваниях, сопровождающихся гиперплазией костного мозга.
■ Мегакариоциты и мегакариобласты выявляют в небольших количествах, они располагаются по периферии препарата, определение их процентного отношения в миелограмме не отражает истинного положения, поэтому их не подсчитывают. Обычно проводят лишь ориентировочную, субъективную оценку относительного сдвига в направлении более молодых или зрелых форм. Увеличение количества мегакариоцитов и мегакариобластов могут вызывать миелопролиферативные процессы и метастазы злокачественных новообразований в костный мозг (особенно при раке желудка). Содержание мегакариоцитов возрастает также при идиопатической аутоиммунной тромбоцитопении, лучевой болезни в период восстановления, хроническом миелолейкозе. Уменьшение количества мегакариоцитов и мегакариобластов (тромбоцито-пении) могут вызывать гипопластические и апластические процессы, в частности, при лучевой болезни, иммунные и аутоиммунные процессы, метастазы злокачественных новообразований (редко). Содержание мегакариоцитов снижается также при острых лейкозах, В12-дефицит-ных анемиях, миеломной болезни, СКВ.
■ Бластные клетки: увеличение их количества с появлением полиморфных уродливых форм на фоне клеточного или гиперклеточного красного костного мозга характерно для острых и хронических лейкозов.
■ Мегалобласты и мегалоциты разных генераций, крупные нейтрофиль-ные миелоциты, метамиелоциты, гиперсегментированные нейтрофилы характерны для витамин В12-дефицитной и фолиеводефицитной анемий.
■ Миелоидные элементы: увеличение количества их зрелых и незрелых форм (реактивный костный мозг) вызывают интоксикации, острое воспаление, гнойные инфекции, шок, острая кровопотеря, туберкулёз, злокачественные новообразования. Промиелоцитарно-миелоцитарный костный мозг с уменьшением количества зрелых гранулоцитов на фоне клеточной или гиперклеточной реакции может вызвать миелотоксичес-кие и иммунные процессы. Резкое уменьшение содержания гранулоци-тов на фоне снижения миелокариоцитов характерно для агранулоци-тоза.
■ Эозинофилия костного мозга возможна при аллергии, глистных инвазиях, злокачественных новообразованиях, острых и хронических мие-лоидных лейкозах, инфекционных заболеваниях.
■ Моноцитоидные клетки: увеличение их количества выявляют при острых и хронических моноцитарных лейкозах, инфекционном мононук-леозе, хронических инфекциях, злокачественных новообразованиях.
■ Атипичные мононуклеары: увеличение их количества на фоне уменьшения зрелых миелокариоцитов могут вызывать вирусные инфекции (инфекционный мононуклеоз, аденовирус, грипп, вирусный гепатит, краснуха, корь и др.).
■ Лимфоидные элементы: увеличение их количества, появление голоядер-ных форм (тени Гумпрехта) при повышении клеточности красного костного мозга могут вызывать лимфопролиферативные заболевания (хронический лимфолейкоз, макроглобулинемия Вальденстрёма, лим-фосаркомы).
■ Плазматические клетки: увеличение их количества с появлением полиморфизма, двуядерных клеток, изменение окраски цитоплазмы могут вызывать плазмоцитомы (плазмобластомы, а также реактивные состояния).
■ Эритрокариоциты: увеличение их количества без нарушения созревания наблюдают при эритремии. Увеличение содержания эритрокариоцитов и уменьшение лейкоэритросоотношения могут вызывать постгеморрагические анемии и большинство гемолитических анемий. Уменьшение содержания эритрокариоцитов при снижении общего количества ми-елокариоцитов и небольшого (относительного) увеличения бластных клеток, лимфоцитов, плазмоцитов вызывают гипоапластические процессы.
■ Раковые клетки и их комплексы выявляют при метастазах злокачественных опухолей.
Для оценки миелограммы важно не столько определение количества костномозговых элементов и их процентного содержания, сколько их взаимное соотношение. Судить о составе миелограммы следует по специально рассчитанным костномозговым индексам, характеризующим эти соотношения.
■ Индекс созревания эритрокариоцитов характеризует состояние эритро-идного ростка, представляет собой отношение процентного содержания нормобластов, содержащих Hb (то есть полихроматофильных и оксифильных), к общему процентному содержанию всех нормоблас-тов. Уменьшение этого индекса отражает задержку гемоглобинизации, что наблюдают при железодефицитных и иногда при гипопластических анемиях.
■ Индекс созревания нейтрофилов характеризует состояние гранулоцитар-ного ростка. Он равен отношению процентного содержания молодых элементов зернистого ряда (промиелоцитов, миелоцитов и метамиело-цитов) к процентному содержанию зрелых гранулоцитов (палочкоядер-ных и сегментоядерных). Увеличение этого индекса при богатом клетками красном костном мозге свидетельствует о задержке созревания нейтрофилов, при бедном клетками костном мозге — о повышенном выходе зрелых клеток из костного мозга и истощении гранулоцитарно-
го резерва [Соболева Т.Н. и др., 1994]. Увеличение индекса созревания нейтрофилов наблюдают при миелолейкозах, лейкемоидных реакциях миелоидного типа, некоторых формах агранулоцитоза; его уменьшение — при задержке созревания на стадии зрелых гранулоцитов или задержке их вымывания (при гиперспленизме, некоторых инфекционных и гнойных процессах).
■ Лейкоэритробластическое соотношение представляет собой отношение суммы процентного содержания всех элементов гранулоцитарного ростка к сумме процентного содержания всех элементов эритроидного ростка костного мозга. В норме это соотношение составляет 2 : 1-4 : 1, то есть в нормальном костном мозге количество белых клеток в 2-4 раза превышает количество красных. Увеличение индекса при высокой клеточности красного костного мозга (более 150х10 9 /л) свидетельствует о гиперплазии лейкоцитарного ростка (хронический лейкоз); при низкой клеточности (менее 80х10 9 /л) — о редукции красного ростка (апластическая анемия) или большой примеси периферической крови. Уменьшение индекса при высокой клеточности красного костного мозга свидетельствует о гиперплазии красного ростка (гемолитическая анемия), при низкой клеточности — о преимущественной редукции гранулоцитарного ростка (агранулоцитоз). Лейкоэритробластическое соотношение уменьшается при гемолитических, железодефицитных, постгеморрагических, В12-дефицитных анемиях, увеличивается при лейкозах и, иногда, при угнетении эритроидного ростка у больных с гипопластической анемией.
Алгоритмы комплексной диагностики различных видов анемий представлены на Рис. 2-5.
Миелограммой называется процентное соотношение клеточных элементов в мазках, которые готовятся из пунктатов костного мозга.
Костный мозг состоит из клеток двух видов:
- клетки кроветворной ткани (паренхимы) костного мозга с их производными зрелыми клетками крови;
- клетки ретикулярной стромы, которые составляют абсолютное численное меньшинство:
- фибробласты;
- остеобласты;
- жировые клетки;
- эндотелиальные клетки.
Нормальная миелограмма взрослого человека:
- Бласты — 0,1-1,1%.
- Миелобласты — 0,2-1,7%.
- Нейтрофилы:
- промиелоциты — 1,0-4,1%.
- миелоциты — 7,0-12,2%.
- метамиелоциты — 8,0-15,0%.
- палочкоядерные — 12,8-23,7%.
- сегментоядерные — 13,1-24,1%.
- Нейтрофильные элементы — 52,7-68,9%.
- Индекс созревания нейтрофилов — 0,5-0,9%.
- Эозинофилы всех генераций — 0,5-5,8%.
- Базофилы — 0-0,5%.
- Лимфоциты — 4,3-13,7%.
- Моноциты — 0,7-3,1%.
- Плазматические клетки — 0,1-1,8%.
- Эритробласты — 0,2-1,1%.
- Пронормоциты — 0,1-1,2%.
- Нормоциты:
- базофильные — 1,4-4,6%.
- полихроматофильные — 8,9-16,9%.
- оксифильные — 0,8-5,6%.
- Эритроидные элементы — 14,5-26,5%.
- Ретикулярные клетки — 0,1-1,6%.
- Индекс созревания эритрокариоцитов — 0,7-0,9%.
- Лейктоэритробластическое соотношение — 2,1-4,5.
- Миелокариоциты в норме — 41,6..195,0·10 9 /л.
- Мегакариоциты в норме — 0,05..0,15·10 9 /л (0,2..0,4% костномозговых элементов).
В современной клинической практике биопсия костного мозга является обязательным методом гематологической диагностики, позволяя оценить тканевые взаимоотношения в костном мозге с целью подтверждения или установки диагноза разнообразных форм анемий и гемобластозов.
Оценка миелограммы должна проводиться в сопоставлении с картиной периферической крови.
Биопсия костного мозга осуществляется путем пункции грудины или подвздошной кости, после чего из взятого пунктата костного мозга готовятся мазки для цитологического исследования. Во время аспирации костного мозга насасывание крови тем больше, чем больше получено аспирата. Как правило разведение пунктата периферической кровью не превышает 2,5 раза. Признаками большой степени разведения костного мозга периферической кровью являются:
- Бедность пунктата клеточными элементами;
- Отсутствие мегакариоцитов;
- При лейкоэритробластическом соотношении выше 20:1 исследование пунктата не производится;
- Снижение индекса созревания нейтрофилов до 0,4..0.2;
- Приближение процентного содержания сегментоядерных нейтрофилов (лимфоцитов) к их числу в периферической крови.
Клинические исследования костного мозга включают определение абсолютного содержание миелокариоцитов, мегакариоцитов, подсчет процентного содержания элементов костного мозга.
Причины низкого содержания миелокариоцитов:
- гипопластические процессы разнообразной этиологии;
- воздействие ионизирующего облучения;
- воздействие химических и лекарственных препаратов.
Получаемый костномозговой пунктат особенно скуден при развитии миелофиброза, миелосклероза. Пунктат получают с трудом при наличии между костномозговыми элементами синцитиальной связи, поэтому содержание ядерных элементов в пунктате может не отвечать истинному содержанию миелокариоцитов в костном мозге.
Причины высокого содержания миелокариоцитов:
- лейкозы;
- В12-дефицитная анемия;
- гемолитическая анемия;
- постгеморрагическая анемия;
- другие состояния, сопровождающиеся гиперплазией костного мозга.
Мегакариоциты и мегакариобласты в пунктате костного мозга не подсчитываются, поскольку встречаются они в незначительных количествах и располагаются по периферии препарата. Как правило, проводится ориентировочная оценка этих элементов относительно их сдвига в направлении более молодых или зрелых форм.
Причины низкого содержания мегакариоцитов и мегакариобластов (тромбоцитопения):
- лучевая болезнь;
- аутоиммунные процессы;
- в редких случаях раковые метастазы;
- острые лейкозы;
- миеломная болезнь;
- системная красная волчанка;
- В12-дефицитная анемия.
Причины высокого содержания мегакариоцитов и мегакариобластов:
- миелопрофелиративные процессы;
- раковые метастазы в костный мозг (особенно рак желудка);
- идиопатическая аутоиммунная тромбоцитопения;
- лучевая болезнь в период выздоровления;
- хронический миелолейкоз.
Другие элементы костного мозга:
Причины высокого содержания бластных клеток: с появлением уродливых форм на фоне клеточного (гиперклеточного) костного мозга наблюдается при остром и хроническом лейкозе.
Присутствие мегалобластов и мегалоцитов различных генераций характерно для фолиеводефицитной анемии и В12-дефицитной анемии.
Причины высокого содержания миелоидных элементов (реактивный костный мозг): интоксикация, гнойная инфекция, острый воспалительный процесс, гнойная инфекция, шок, острая кровопотеря, туберкулез, рак.
Причины эозинофилии костного мозга: аллергия, глистная инвазия, рак, миелоидный лейкоз, инфекция.
Причины высокого содержания моноцитоидных клеток: хронический моноцитарный лейкоз, инфекционный мононуклеоз, хроническая инфекция, рак.
Причины высокого содержания атипичных мононуклеаров на фоне снижения зрелых миелокариоцитов: инфекционный мононуклеоз, аденовирус, грипп, вирусный гепатит, краснуха, корь и проч.
Причины высокого содержания плазматических клеток с полиморфизмом, появлением двухядерных клеток, изменением окраски цитоплазмы вызывают плазмоцитозы.
Причины высокого содержания лимфоидных элементов: хронический лимфолейкоз, макроглобулинемия Вальденстрема, лимфосаркома.
Причины высокого содержания эритрокариоцитов без нарушения созревания наблюдается при эритремии.
Причины низкого содержания эритрокариоцитов при снижении общего миелокариоцитов и незначительного увеличения бластных клеток, лимфоцитов, плазмоцитов происходит при гипоапластических процессах.
Индекс созревания эритрокариоцитов отражает состояние эритроидного ростка кроветворения — отношение процента нормобластов, содержащих гемоглобин, к общему проценту всех нормобластов. Снижение индекса созревания эритрокариоцитов говорит о задержке гемоглобинизации с преобладанием молодых базофильных форм, что может наблюдаться при железодефицитной анемии, В12-дефицитной анемии, иногда при гипопластической анемии.
Индекс созревания нейтрофилов отражает состояние гранулоцитарного ростка — отношение процента промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов (молодые элементы зернистого ряда) к проценту палочкоядерных и сегментоядерных (зрелые гранулоциты). Увеличение индекса созревания нейтрофилов говорит о задержке их созревания при богатом костном мозге, при бедном — о повышенном выходе зрелых клеток из костного мозга и истощении гранулоцитарного резерва.
Увеличение индекса созревания нейтрофилов сопровождает следующие болезни и состояния:
- миелолейкоз;
- лейкемоидные реакции миелоидного типа;
- некоторые формы агранулоцитоза.
Снижение индекса созревания нейтрофилов сопровождает следующие болезни и состояния:
- задержка созревания на стадии зрелых гранулоцитов;
- задержка вымывания зрелых гранулоцитов;
- гиперспленизм;
- инфекционные и гнойные процессы.
Лейкоэритробластическое соотношение — отношение суммы процентного содержания всех элементов гранулоцитарного ростка костного мозга к сумме процентного содержания всех элементов эритроидного ростка. В норме количество белых клеток в 2-4 раза превышает количество красных (лейкоэритробластическое соотношение = 2..4).
Повышение лейкоэритробластического индекса при богатом костном мозге (более 150·10 9 /л) говорит о гиперплазии лейкоцитарного ростка, что наблюдается при хроническом лейкозе; при бедном костном мозге (менее 80·10 9 /л) — о редукции крастного ростка при апластической анемии или большой примеси периферической крови.
Снижение лейкоэритробластического индекса при богатом костном мозге (более 150·10 9 /л) говорит о гиперплазии красного ростка, что наблюдается при гемолитической анемии; при бедном костном мозге (менее 80·10 9 /л) — о преимущественной редукции гранулоцитарного ростка при агранулоцитозе.
Причины снижения лейкоэритробластического индекса:
- гемолитическая анемия;
- железодефицитная анемия;
- постгеморрагическая анемия;
- В12-дефицитная анемия.
Причины повышения лейкоэритробластического индекса:
- лейкозы;
- гипопластическая анемия с угнетением эритроидного ростка.
ВНИМАНИЕ! Приведенная на данном сайте информация носит справочный характер. Ставить диагноз и назначать лечение может только врач-специалист в конкретной области.